紫外可见分光光度计都有一个根据使用需要而设计的光度室(又叫样品室)。光度室是使用者直接操作的地方。从单色器出来的单色光，一般是通过一个小透镜射到比色皿上，比色皿中的试样对单色光吸收一部分，透过一部分。其透过部分射到光电接收器上转变成电信号，再通过电子系统进行放大、处理，然后打印输出。
光度室一般由光度室盖、聚光透镜、比色皿、比色皿架、石英窗片等组成。
1.光度室盖。光度室要求严防漏光，这取决于光度室盖。许多仪器制造商和使用者，往往不注意这个问题。有的仪器在光度室盖门的地方不密封，或者实验室房间的白光可进入光度室系统，所以测试结果因杂散光增大而导致误差增大。因此，光度室盖门的密封性很重要。使用者应经常检查光度室的密封性，严格做到光度室系统不漏光，以减少杂散光，保证分析测试结果的可靠性。
2.聚光透镜。聚光透镜将从单色器射出的发散光变成平行光(有些仪器为聚光，但不符合比耳定律)，再射到比色皿上。如果射到样品上，则要求单色器的出射狭缝处在聚光透镜的焦点上。聚光透镜要求消色差，否则不同波长的光不能聚在比色皿的中心。但有些普及型的紫外可见分光光度计仪器也有不用聚透镜的。有些要求不高的仪器为加强聚光能力，聚光透镜只是把从单色器射出的发散光直接聚在比色皿。
3.比色皿。比色皿又称吸收池或样品池，是光度室的关键部件。我们在分析测试时，一般是同时利用两个分别盛有参比溶液和被测样品溶液的比色皿，对它们进行分别测试(双光束仪器同时测试)，比较测试的吸光度(或透射比，一般都是比较吸光度)。因此，为了建立准确比较的基础，对比色皿的大小、形状及比色皿的两块透光面的平行度、光路长度、光谱特性等都应该进行匹配(配对)。即使是同一批次的同一规格的比色皿，其光路长度也不可能兔全相等，透光面的透光特性、几何尺寸、平行度等都可能有差异，因此需要挑选配对使用。
比色皿几何尺寸的误差会给测试结果带来很大的误差。由比色皿引起的分析误差可以根据比耳定律计算出来。
应该注意的一个重要问题是，在相对测量法中，如果随意调换参比比色皿与样品比色皿，比色皿的光程误差与配套误差是不可忽视的。特别是比色皿的配套误差，更应引起使用者的高度重视。
